Plásmido CRISPR de Activación (h) G2A: sc-401866-ACT

GPR132 codifica G2A, un receptor acoplado a proteína G implicado en la detección de mediadores lipídicos extracelulares y señales del microambiente que moldean las respuestas inmunitarias y al estrés. La señalización de G2A se ha vinculado con la regulación de la quimiotaxis de leucocitos, la activación de macrófagos y el tono inflamatorio mediante vías de segundos mensajeros dependientes de GPCR, influyendo en programas de supervivencia y diferenciación celular. En tejidos humanos, la actividad alterada de GPR132 se asocia con inflamación desregulada y procesos de remodelación que se entrecruzan con las interacciones tumor–inmunidad y la biología del estrés metabólico. Como receptor de membrana con salidas de señalización dependientes del contexto, G2A se estudia con frecuencia para entender cómo la detección de lípidos se integra con el tráfico de células inmunitarias y la homeostasis tisular.

G2A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPR132 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

G2A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPR132 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPR132, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de G2A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPR132 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de G2A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía G2A en células tumorales con expresión de GPR132 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.