Plasmide CRISPR d'Activation (h2) FUT2: sc-409559-ACT-2

Le gène humain FUT2 code l’α(1,2)-fucosyltransférase 2 (FUT2), une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse la fucosylation terminale des glycannes afin de générer l’antigène H de type 1 et des épitopes fucosylés apparentés à la surface des muqueuses et sur les glycoprotéines sécrétées. En contrôlant le statut de sécréteur, FUT2 module des processus dépendants des glycannes, notamment la présentation des antigènes ABO dans les sécrétions, la biologie de la barrière épithéliale et les interactions hôte–microbe qui façonnent l’immunité muqueuse et la composition du microbiome. Les variations génétiques ou la perte d’activité de FUT2 sont associées à une susceptibilité modifiée aux infections et à des phénotypes inflammatoires, et ont été reliées à des traits tels que le risque de maladie inflammatoire chronique de l’intestin, la susceptibilité au norovirus et des modifications de la structure des communautés microbiennes. L’édition du gène FUT2 et les perturbations fonctionnelles de son activité sont utilisées pour disséquer les voies de glycosylation, cartographier les déterminants de liaison des lectines et des agents pathogènes, et modéliser la manière dont la fucosylation muqueuse influence la signalisation immunitaire et la physiologie épithéliale dans des systèmes cellulaires humains.

FUT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FUT2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FUT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FUT2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FUT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FUT2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FUT2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FUT2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FUT2 dans les cellules tumorales présentant une expression de FUT2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.