Plasmide CRISPR d'Activation (h) FUS/TLS: sc-400612-ACT

FUS (FUS/TLS) code une protéine de liaison à l’ARN/ADN qui coordonne plusieurs étapes de l’expression génique, notamment la régulation transcriptionnelle, l’épissage du pré‑ARNm, le transport de l’ARNm et la biogenèse des microARN. FUS participe à la réponse aux dommages de l’ADN et au maintien du génome via ses interactions avec des facteurs de réparation et en couplant la transcription au traitement de l’ARN, et elle se redistribue de manière dynamique vers les granules de stress en conditions de stress cellulaire. Par ces rôles, FUS influence l’homéostasie neuronale et les voies de protéostase, où un contrôle précis du métabolisme de l’ARN est essentiel. La dérégulation, l’agrégation ou les mutations de FUS sont fortement associées à la biologie des maladies neurodégénératives, dont la sclérose latérale amyotrophique et la dégénérescence lobaire frontotemporale, ce qui en fait un modèle largement utilisé pour l’étude des protéinopathies liées aux protéines de liaison à l’ARN.

FUS/TLS Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FUS sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FUS/TLS Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FUS dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FUS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FUS/TLS. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FUS natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FUS/TLS au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FUS/TLS dans les cellules tumorales présentant une expression de FUS silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.