FUNDC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403031-ACT

FUNDC1 (FUN14 domain containing 1) codifica um receptor da membrana externa mitocondrial que regula a mitofagia responsiva à hipóxia e ao estresse. Ao se ligar à LC3 por meio do seu motivo LIR e sofrer controle dependente de fosforilação, a FUNDC1 ajuda a coordenar o controle de qualidade mitocondrial, a renovação de organelas e a adaptação bioenergética, integrando sinais da dinâmica mitocondrial e de vias de estresse oxidativo. Alterações na atividade de FUNDC1 foram associadas à mitofagia desregulada e à disfunção mitocondrial, processos relevantes para a neurodegeneração, para modelos de lesão celular relacionada à isquemia e para mecanismos de doenças metabólicas.

FUNDC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FUNDC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FUNDC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FUNDC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FUNDC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FUNDC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FUNDC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FUNDC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FUNDC1 em células tumorais com expressão de FUNDC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.