Particules Lentivirales d'Activation (h) fumarate hydratase: sc-401660-LAC

Le gène humain **FH** code la fumarate hydratase, une enzyme mitochondriale qui catalyse l’hydratation réversible du fumarate en **L-malate** dans le cycle de l’acide tricarboxylique (TCA), reliant le métabolisme oxydatif à l’équilibre rédox cellulaire. L’activité de FH soutient l’anaplérose, la production de NADH et la coordination de la fonction mitochondriale avec les programmes métaboliques cytosoliques. Une perturbation de FH peut entraîner une accumulation de fumarate, qui affecte la signalisation de l’hypoxie, la régulation épigénétique et les voies de réponse au stress via la modification de l’activité d’enzymes dépendantes de métabolites. Par conséquent, FH est largement étudiée dans le contexte du reprogrammation métabolique et de la biologie tumorale, ainsi que dans des modèles de maladies métaboliques héréditaires affectant l’homéostasie énergétique.

Les particules d'activation lentivirales fumarate hydratase (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de FH dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales fumarate hydratase (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription FH, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de fumarate hydratase. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif FH ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.