Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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fumarate hydratase Double Nickase Plasmid (h): sc-401660-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das fumarate hydratase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- fumarate hydratase Double-Nickase-Plasmid (h) und fumarate hydratase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: fumarate hydratase: sc-393992
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
fumarate hydratase Double Nickase Plasmid (h) | sc-401660-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
fumarate hydratase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401660-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane FH-Gen kodiert die Fumarat-Hydratase (Fumarase), ein zentrales Enzym des Tricarbonsäurezyklus (TCA-Zyklus), das die reversible Hydratisierung von Fumarat zu L‑Malat katalysiert und damit den oxidativen Stoffwechsel sowie das zelluläre Redoxgleichgewicht unterstützt. Durch die Kontrolle der Fumaratspiegel beeinflusst FH die mitochondriale Bioenergetik und metabolitenabhängige Signalwege, darunter Pfade, die mit Hypoxieantworten und epigenetischer Regulation verknüpft sind. Eine Störung der FH-Funktion ist mit einer Anreicherung von Fumarat und einer umfassenden metabolischen Umprogrammierung verbunden, die den Umgang mit oxidativem Stress und transkriptionelle Programme verändern kann. Diese Eigenschaften machen FH zu einem häufig genutzten Knotenpunkt für Studien zur mitochondrialen Stoffwechselregulation, zur Onkometabolit-Biologie und zur metabolischen Kontrolle des Zellzustands.
fumarate hydratase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.