Plasmide Double Nickase (h) FucT-VIII: sc-402957-NIC

Le gène humain **FUT8** code l’**α1,6‑fucosyltransférase** (FucT‑VIII), une enzyme localisée dans l’appareil de Golgi qui catalyse la **fucosylation du cœur** des glycannes **N‑liés** sur les glycoprotéines. Cette modification est un déterminant majeur de la maturation des glycoprotéines, des interactions récepteur‑ligand et de la transduction du signal en aval, influençant des processus tels que l’adhésion cellulaire, la fonction des récepteurs immunitaires et la signalisation des facteurs de croissance. L’activité de FUT8 s’intègre à la voie de la N‑glycosylation et au trafic cellulaire via la voie sécrétoire, modulant la stabilité des protéines et leur présentation à la surface cellulaire. Une fucosylation du cœur dérégulée a été associée à des réseaux de signalisation altérés et à un remodelage des glycoprotéines observés dans divers contextes pertinents pour la maladie, notamment l’inflammation et la transformation oncogénique.

FucT-VIII Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FUT8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FUT8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FUT8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FUT8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.