Plásmido Doble Nickase (h) FucT-VIII: sc-402957-NIC

El gen humano **FUT8** codifica la **α1,6-fucosiltransferasa** (FucT-VIII), una enzima localizada en el aparato de Golgi que cataliza la **fucosilación del núcleo** de los **N-glicanos** en glicoproteínas. Esta modificación es un determinante clave de la maduración de las glicoproteínas, de las interacciones receptor–ligando y de la transducción de señales aguas abajo, e influye en procesos como la adhesión celular, la función de receptores inmunitarios y la señalización de factores de crecimiento. La actividad de FUT8 se integra con la vía de N-glicosilación y con el tráfico celular a través de la vía secretora, modulando la estabilidad proteica y su presentación en la superficie celular. La desregulación de la fucosilación del núcleo se ha asociado con redes de señalización alteradas y con la remodelación de glicoproteínas observadas en múltiples contextos relevantes para enfermedades, como la inflamación y la transformación oncogénica.

FucT-VIII El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FUT8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FUT8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FUT8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FUT8 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.