FucT-IX Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416354-ACT

FUT9 codifica la α1,3-fucosiltransferasi IX (FucT-IX), una glicosiltransferasi residente nel Golgi che catalizza le fasi terminali di fucosilazione nella biosintesi degli antigeni di tipo Lewis, incluso Lewis X (CD15). Modellando le strutture dei glicani sulla superficie cellulare e secreti, FucT-IX influenza eventi di riconoscimento dipendenti dai glicani coinvolti in adesione cellulare, migrazione e interazioni tra cellule immunitarie. L’attività di FUT9 si inserisce in reti più ampie di glicosilazione che modulano la segnalazione dei recettori, i programmi di sviluppo e la differenziazione specifica di linea, in particolare in contesti neurali ed ematopoietici. Pattern di fucosilazione alterati e la deregolazione di FUT9 sono stati associati a cambiamenti nel comportamento delle cellule tumorali e nei microambienti infiammatori, rendendo FUT9 un bersaglio utile per studi meccanicistici dei glico-epitopi nella biologia delle malattie.

FucT-IX Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FUT9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FucT-IX Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FUT9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FUT9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FucT-IX. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FUT9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FucT-IX nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FucT-IX nelle cellule tumorali con espressione di FUT9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.