Plasmide CRISPR/Cas9 KO Fucokinase (h): sc-409449

Présentation

Le gène humain **FUK** code la fucokinase, une kinase cytosolique qui phosphoryle la L‑fucose en fucose‑1‑phosphate dans la voie de recyclage du fucose, fournissant ainsi un substrat pour la biosynthèse du GDP‑fucose. En contribuant aux réserves cellulaires de fucose activé, FUK soutient la fucosylation des glycoprotéines et des glycolipides, une modification qui module la signalisation des récepteurs, l’adhérence cellule‑cellule et la reconnaissance immunitaire. Des altérations du métabolisme du fucose et des profils de fucosylation ont été associées à une inflammation dérégulée, à une signalisation oncogénique et à des modifications de l’invasivité des cellules tumorales, faisant de FUK un nœud pertinent pour l’étude de phénotypes dépendants des glycannes. L’étude fonctionnelle de FUK aide à relier le flux métabolique au sein des voies des sucres nucléotidiques à la production des glycosyltransférases et aux changements en aval des glycoprotéomes membranaires et sécrétés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Fucokinase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FUK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FUK, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FUK à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Fucokinase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FUK pour l'étude de la signalisation de Fucokinase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FUK essentiels à la fonction de Fucokinase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FUK pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Fucokinase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Fucokinase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FUK. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Fucokinase plasmide HDR (h) et le Fucokinase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FUK pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FUK définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.