Plasmide CRISPR/Cas9 KO FUCA2 (h): sc-405221

Présentation

FUCA2 code l’alpha‑L‑fucosidase 2, une glycosidase de type lysosomal sécrétée qui hydrolyse les résidus terminaux de fucose des glycoconjugués et glycolipides N‑ et O‑liés, contribuant au catabolisme et au remodelage des glycannes. En modulant l’état de fucosylation des protéines de surface cellulaire et de la matrice extracellulaire, FUCA2 peut influencer des processus tels que le renouvellement des récepteurs, l’adhésion cellule‑cellule et la signalisation des glycannes associée au système immunitaire. Des altérations du métabolisme du fucose et de l’activité fucosidase ont été associées à des modifications des réponses inflammatoires et des profils de glycosylation liés aux tumeurs, faisant de FUCA2 un nœud pertinent pour l’étude des phénotypes guidés par la glycomique. Les études fonctionnelles portent souvent sur la manière dont la défucosylation dépendante de FUCA2 affecte le trafic intracellulaire, la fonction lysosomale et les voies de signalisation médiées par les glycoprotéines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FUCA2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FUCA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FUCA2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FUCA2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FUCA2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FUCA2 pour l'étude de la signalisation de FUCA2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FUCA2 essentiels à la fonction de FUCA2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FUCA2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FUCA2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FUCA2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FUCA2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FUCA2 plasmide HDR (h) et le FUCA2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FUCA2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FUCA2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.