Plasmide CRISPR d'Activation (h) FTα: sc-403920-ACT

FNTA code la sous-unité alpha de la farnésyltransférase protéique (FTα), qui forme un complexe prényle‑transférase hétérodimérique catalysant la farnésylation des protéines portant un motif CAAX en C‑terminal. Cette modification lipidique favorise l’association à la membrane, le trafic subcellulaire et les interactions protéine‑protéine de régulateurs clés de la signalisation, notamment des membres de la superfamille RAS, influençant ainsi des voies contrôlant la prolifération, la différenciation et l’organisation du cytosquelette. Des altérations de la dynamique de prénylation et du traitement dépendant de FNTA ont été associées à une dérégulation de la signalisation oncogénique, à des programmes anormaux de croissance cellulaire et à des défauts d’organisation intracellulaire pertinents pour la biologie du cancer et d’autres troubles prolifératifs.

FTα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FNTA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FTα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FNTA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FNTA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FTα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FNTA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FTα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FTα dans les cellules tumorales présentant une expression de FNTA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.