Plasmide CRISPR/Cas9 KO FRRS1 (m): sc-422860

Présentation

Frrs1 code FRRS1, une protéine associée au réticulum endoplasmique impliquée dans la maturation et la régulation fonctionnelle des récepteurs du glutamate de type AMPA. Dans les neurones, FRRS1 participe au développement des synapses glutamatergiques et à la neurotransmission excitatrice en soutenant l’assemblage/le trafic des récepteurs et leur disponibilité synaptique. La perturbation des processus liés à FRRS1 peut modifier l’homéostasie de la signalisation synaptique et l’activité des réseaux neuronaux, faisant de Frrs1 une cible pertinente pour étudier les mécanismes à l’origine de phénotypes neurodéveloppementaux et neurologiques. Les modèles murins de Frrs1 sont donc utiles pour disséquer les voies de biogenèse des récepteurs et les programmes cellulaires liés à la plasticité synaptique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FRRS1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Frrs1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Frrs1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Frrs1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FRRS1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Frrs1 pour l'étude de la signalisation de FRRS1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Frrs1 essentiels à la fonction de FRRS1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Frrs1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FRRS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FRRS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Frrs1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FRRS1 plasmide HDR (m) et le FRRS1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Frrs1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Frrs1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.