frizzled Double Nickase Plasmid (h): sc-401592-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das frizzled-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- frizzled-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und frizzled-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FZD2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
frizzled Double Nickase Plasmid (h) | sc-401592-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
frizzled-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401592-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FZD2 kodiert den menschlichen Frizzled-2-Rezeptor, einen WNT-Rezeptor mit sieben Transmembrandomänen, der die ligandenabhängige Aktivierung der kanonischen β‑Catenin-Signalübertragung sowie der nicht-kanonischen Signalwege der planaren Zellpolarität und des WNT/Ca²⁺-Signalwegs koordiniert. Über Interaktionen mit WNT-Liganden und Korezeptoren moduliert FZD2 während der Entwicklung und der Gewebehomöostase die Festlegung des Zellschicksals, die Polarität, Proliferation und das Migrationsverhalten. Eine veränderte FZD2-Expression oder Signalleistung wurde mit einer fehlregulierten WNT-Signalwegaktivität in unterschiedlichen krankheitsrelevanten Kontexten in Verbindung gebracht, darunter tumorassoziierte EMT-Programme und abnorme Gewebeumbauprozesse. Da die WNT–FZD2-Signalgebung Transkriptionsnetzwerke und die Zytoskelettdynamik umgestalten kann, wird FZD2 häufig in der Pathway-Kartierung, bei der Untersuchung der Rezeptor‑Ligand-Spezifität und bei der Aufklärung von Mechanismen, die Invasion und Differenzierung steuern, untersucht.
frizzled-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FZD2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FZD2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FZD2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FZD2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.