Plasmide Double Nickase (m) frizzled-7: sc-420437-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) frizzled-7 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide frizzled-7 Double Nickase (m) et le plasmide frizzled-7 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Fzd7. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) frizzled-7 | sc-420437-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Fzd7** code **frizzled-7**, un récepteur WNT à sept domaines transmembranaires qui coordonne une signalisation dépendante du ligand via la voie canonique **β-caténine/TCF** et les voies non canoniques de **polarité planaire cellulaire** et **WNT/Ca²⁺**. En régulant les décisions de destinée cellulaire, la prolifération, la polarité et la migration, frizzled-7 contribue à la mise en place des patrons embryonnaires et à l’homéostasie des tissus adultes, notamment au maintien des cellules souches et progénitrices. Des altérations de la signalisation médiée par Fzd7 ont été associées à une dérégulation de l’activité de la voie WNT observée dans des modèles d’oncogenèse, de fibrose et de remodelage tissulaire inflammatoire, où des changements de la sortie β-caténine et de la dynamique du cytosquelette peuvent influencer des phénotypes pertinents pour la maladie. En conséquence, Fzd7 est largement étudié dans les voies qui gouvernent l’organisation épithéliale, les réponses régénératives et les interactions de signalisation dépendantes de la niche.
frizzled-7 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Fzd7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Fzd7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Fzd7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Fzd7.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.