Plasmide Double Nickase (h) frizzled-7: sc-401590-NIC

FZD7 code la protéine frizzled-7, un récepteur Wnt à sept domaines transmembranaires qui se lie aux ligands WNT et transmet des signaux via la transcription canonique dépendante de la β-caténine, ainsi que via des voies non canoniques de polarité planaire cellulaire et de signalisation au Ca²⁺. Par l’intermédiaire de ces réseaux, frizzled-7 influence la détermination du destin cellulaire, la prolifération, la polarité et la migration, en s’intégrant à des médiateurs en aval tels que Dishevelled et en régulant des programmes de gènes cibles qui façonnent l’homéostasie tissulaire. Une signalisation FZD7/Wnt aberrante a été associée à des phénotypes de type « stem », à des processus liés à la transition épithélio-mésenchymateuse et à des interactions modifiées avec le microenvironnement tumoral dans de multiples contextes pathologiques. Par conséquent, FZD7 est fréquemment étudié comme un nœud de la modulation de la voie Wnt, de la sélectivité récepteur–ligand et du crosstalk entre voies en biologie du développement et du cancer.

frizzled-7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FZD7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FZD7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FZD7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FZD7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.