Plasmide CRISPR/Cas9 KO frizzled-7 (m): sc-420437

Présentation

Le gène murin **Fzd7** code **Frizzled-7**, un récepteur Wnt à sept domaines transmembranaires qui convertit des ligands Wnt extracellulaires en signaux intracellulaires. Frizzled-7 régule des programmes transcriptionnels dépendants de la β-caténine ainsi que les voies non canoniques de polarité planaire (PCP) et Wnt/Ca²⁺, influençant la prolifération, la polarité, la migration et les décisions de destin cellulaire au cours du développement et du maintien de l’homéostasie tissulaire. Une signalisation Fzd7 altérée a été associée, dans plusieurs modèles expérimentaux, à un comportement dérégulé des cellules souches/progénitrices et à l’activation de voies oncogéniques, ce qui en fait un point d’entrée utile pour disséquer le contrôle des réseaux Wnt. Dans les systèmes cellulaires, la perturbation de Fzd7 est couramment utilisée pour étudier la spécificité de la signalisation Wnt au niveau des récepteurs et les interactions avec les récepteurs à activité tyrosine kinase ainsi qu’avec des processus associés à Hippo/YAP.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO frizzled-7 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fzd7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fzd7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fzd7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine frizzled-7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fzd7 pour l'étude de la signalisation de frizzled-7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fzd7 essentiels à la fonction de frizzled-7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fzd7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le frizzled-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le frizzled-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fzd7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le frizzled-7 plasmide HDR (m) et le frizzled-7 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fzd7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fzd7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.