Plasmide CRISPR d'Activation (h) Frataxin: sc-401628-ACT

FXN code la protéine mitochondriale humaine frataxine, un régulateur central de la biogenèse des clusters fer–soufre (Fe–S) qui soutient la phosphorylation oxydative, le fonctionnement des enzymes du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs) et l’homéostasie rédox. La frataxine participe à la gestion du fer dans la mitochondrie et coordonne l’assemblage des cofacteurs Fe–S requis pour le transport d’électrons et de nombreuses enzymes métaboliques. Une diminution de l’expression de FXN est associée à une dysfonction mitochondriale, un stress oxydant et une altération du métabolisme du fer, reliant cette voie à la neurodégénérescence et à des phénotypes cardiométaboliques. Par conséquent, FXN est largement étudié dans des modèles explorant le contrôle qualité mitochondrial, le remodelage bioénergétique et la signalisation de réponse au stress.

Frataxin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FXN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Frataxin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FXN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FXN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Frataxin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FXN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Frataxin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Frataxin dans les cellules tumorales présentant une expression de FXN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.