Plasmide CRISPR/Cas9 KO FRAT2 (h): sc-406802

Présentation

FRAT2 (Frequently rearranged in advanced T-cell lymphomas 2) code une protéine cytoplasmique qui module la signalisation canonique Wnt/β‑caténine en interagissant avec GSK3β et en influençant la stabilité de la β‑caténine ainsi que les programmes transcriptionnels en aval. Par cette voie, FRAT2 contribue à la régulation de la prolifération cellulaire, de la différenciation et de la mise en place des patrons du développement, et peut s’articuler avec des réseaux de signalisation plus larges qui contrôlent la progression du cycle cellulaire et les décisions de destinée cellulaire. Une activité altérée de la voie Wnt est impliquée dans de nombreux contextes pathologiques, notamment la transformation oncogène et le remodelage tissulaire, faisant de FRAT2 un nœud utile pour analyser l’expression génique dépendante de la β‑caténine. L’étude fonctionnelle de FRAT2 soutient des travaux mécanistiques sur les interactions entre voies de signalisation et la régulation dépendante du contexte dans des systèmes cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FRAT2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FRAT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FRAT2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FRAT2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FRAT2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FRAT2 pour l'étude de la signalisation de FRAT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FRAT2 essentiels à la fonction de FRAT2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FRAT2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FRAT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FRAT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FRAT2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FRAT2 plasmide HDR (h) et le FRAT2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FRAT2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FRAT2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.