Plasmide CRISPR/Cas9 KO FRAT1 (h): sc-406922

Présentation

FRAT1 (frequently rearranged in advanced T-cell lymphomas 1) code un régulateur positif de la voie Wnt/β-caténine, qui renforce la signalisation en inhibant des événements de phosphorylation dépendants de GSK3, stabilisant ainsi la β-caténine et amplifiant des programmes transcriptionnels liés à la prolifération et à la différenciation. En modulant des composants cytoplasmiques et nucléaires de la signalisation Wnt, FRAT1 influence les décisions de destinée cellulaire, la progression du cycle cellulaire et, selon le contexte, le contrôle de la migration. Une expression altérée de FRAT1 a été rapportée dans de nombreux types de tumeurs et le gène est fréquemment étudié comme un nœud reliant l’activité de la voie Wnt à des réseaux transcriptionnels oncogéniques. FRAT1 est donc pertinent pour analyser les interactions entre voies de signalisation affectant les états de type « cellule souche », les programmes associés à la transition épithélio-mésenchymateuse et la régulation transcriptionnelle dépendante des signaux dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FRAT1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FRAT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FRAT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FRAT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FRAT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FRAT1 pour l'étude de la signalisation de FRAT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FRAT1 essentiels à la fonction de FRAT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FRAT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FRAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FRAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FRAT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FRAT1 plasmide HDR (h) et le FRAT1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FRAT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FRAT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.