Plásmido CRISPR de Activación (h) fractalkine: sc-402339-ACT

CX3CL1 codifica la fractalquina, una quimiocina CX3C única que existe tanto como una molécula de adhesión anclada a la membrana como un quimioatrayente soluble. A través de su receptor CX3CR1, la fractalquina regula la adhesión de leucocitos, la quimiotaxis y la comunicación microglía–neurona, vinculando la señalización de quimiocinas con el tráfico inflamatorio y la vigilancia tisular. La actividad CX3CL1–CX3CR1 se entrecruza con programas inflamatorios impulsados por NF-κB y modula la activación endotelial y el reclutamiento de células inmunitarias. La desregulación de la señalización de la fractalquina se ha asociado con neuroinflamación, inflamación vascular e interacciones tumor–sistema inmunitario, lo que convierte a CX3CL1 en un nodo útil para estudiar la comunicación cruzada inmuno–estromal y la patobiología inflamatoria.

fractalkine El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CX3CL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

fractalkine El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CX3CL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CX3CL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de fractalkine. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CX3CL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de fractalkine en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía fractalkine en células tumorales con expresión de CX3CL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.