Plasmide CRISPR d'Activation (h) FPR: sc-418173-ACT

Le récepteur 1 des peptides formylés (FPR1) code FPR, un RCPG à sept domaines transmembranaires qui détecte les peptides N‑formylés dérivés des bactéries et des mitochondries endommagées, permettant une chimiotaxie rapide des neutrophiles et des monocytes. FPR1 se couple principalement aux protéines Gi pour activer PLCβ, les flux intracellulaires de Ca2+, les voies PI3K/AKT et MAPK, coordonnant le remodelage de l’actine, l’activation des intégrines, la dégranulation et la production d’espèces réactives de l’oxygène. Par ces voies, FPR1 façonne la surveillance immunitaire innée et le microenvironnement inflammatoire aux sites d’infection ou de lésion tissulaire stérile. Un dérèglement de la signalisation de FPR1 a été étudié dans des affections inflammatoires chroniques et l’inflammation associée aux tumeurs, où une altération du recrutement et de l’activation des leucocytes peut influencer la biologie de la maladie.

FPR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FPR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FPR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FPR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FPR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FPR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FPR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FPR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FPR dans les cellules tumorales présentant une expression de FPR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.