Plasmide CRISPR d'Activation (h) FOXP2: sc-417494-ACT

FOXP2 code un facteur de transcription de la famille forkhead box qui orchestre des programmes de régulation génique indispensables à la différenciation neuronale, à la croissance des neurites et à la plasticité synaptique, avec des rôles majeurs dans les circuits cortico-striataux et cérébelleux impliqués dans l’apprentissage moteur et la vocalisation. En tant que régulateur se liant à l’ADN, FOXP2 module des réseaux transcriptionnels contrôlant l’état de la chromatine, le traitement de l’ARN et la signalisation dépendante de l’activité, qui orientent les trajectoires du neurodéveloppement. Des variations génétiques ou une altération du dosage de FOXP2 ont été associées à des troubles de la parole et du langage ainsi qu’à des phénotypes neurodéveloppementaux plus larges, ce qui en fait un nœud utile pour analyser le contrôle transcriptionnel de la fonction des circuits neuronaux. La modulation expérimentale de FOXP2 étaye les études de spécification de lignage pilotée par des facteurs de transcription et du remodelage des voies en aval dans des modèles cellulaires humains.

FOXP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.