Plasmide CRISPR d'Activation (h) FOXN1: sc-401498-ACT

FOXN1 (forkhead box N1) code un facteur de transcription de la famille Forkhead, indispensable à la différenciation des cellules épithéliales thymiques et au maintien d’un microenvironnement thymique fonctionnel permettant le développement des lymphocytes T. Dans les compartiments épithéliaux, FOXN1 régule des programmes contrôlant la maturation des kératinocytes et la spécification des lignages épithéliaux, reliant une transcription régulée par la chromatine à l’homéostasie tissulaire. Une activité altérée de FOXN1 a été associée à des phénotypes d’immunodéficience dus à une thymopoïèse perturbée, ainsi qu’à des défauts de barrière épithéliale et de différenciation. En tant que régulateur déterminant de l’identité de lignée, FOXN1 est largement utilisé pour étudier les réseaux transcriptionnels gouvernant l’organogenèse du thymus, le dialogue épithélio‑immunitaire et la régulation des gènes du développement.

FOXN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXN1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXN1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXN1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.