FOXN1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401498-ACT

FOXN1 (forkhead box N1) codifica um fator de transcrição da família forkhead que é essencial para a diferenciação de células epiteliais tímicas e para a manutenção de um microambiente tímico funcional que sustenta o desenvolvimento de células T. Em compartimentos epiteliais, o FOXN1 regula programas que controlam a maturação de queratinócitos e a especificação de linhagens epiteliais, conectando a transcrição regulada pela cromatina à homeostase tecidual. Alterações na atividade de FOXN1 têm sido associadas a fenótipos de imunodeficiência decorrentes de timopoiese prejudicada, bem como a defeitos de barreira epitelial e de diferenciação. Como regulador definidor de linhagem, o FOXN1 é amplamente utilizado para estudar redes transcricionais que governam a organogênese do timo, a comunicação cruzada epitélio–imune e a regulação gênica do desenvolvimento.

FOXN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXN1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXN1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXN1 em células tumorais com expressão de FOXN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.