Particules Lentivirales d'Activation (h) FOXJ1: sc-402226-LAC

Le gène humain **FOXJ1** code un facteur de transcription de la famille *forkhead box* qui agit comme régulateur maître de la ciliogenèse motile et de la différenciation des cellules épithéliales. FOXJ1 coordonne des programmes transcriptionnels contrôlant l’ancrage des corps basaux, l’assemblage de l’axonème et l’expression des bras de dynéine, en s’intégrant à des réseaux de signalisation du développement tels que Notch et Wnt pour établir le destin des cellules ciliées. Par son rôle dans la formation des cils des voies aériennes et des cellules épendymaires, une activité altérée de FOXJ1 est associée à une diminution de la clairance mucociliaire et à une dérégulation du flux du liquide céphalorachidien, des processus pertinents pour des phénotypes de type dyskinésie ciliaire primitive et d’autres ciliopathies. FOXJ1 est également utilisé comme marqueur et comme nœud fonctionnel pour étudier les épithéliums multiciliés, la spécification de lignée et le contrôle transcriptionnel des réseaux de gènes ciliaires.

Les particules d'activation lentivirales FOXJ1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de FOXJ1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FOXJ1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription FOXJ1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FOXJ1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif FOXJ1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.