Plasmide CRISPR d'Activation (h) FOXJ1: sc-402226-ACT

Le gène humain **FOXJ1** code un facteur de transcription de la famille forkhead box qui agit comme régulateur maître de la ciliogenèse motile, en coordonnant l’ancrage des corps basaux, l’assemblage de l’axonème et le programme transcriptionnel requis pour la différenciation des cellules multiciliées. L’activité de FOXJ1 s’articule avec des voies de signalisation du développement et de différenciation épithéliale, notamment des réseaux transcriptionnels associés aux cils qui façonnent l’identité des cellules des voies aériennes et des cellules épendymaires. Une expression dérégulée de FOXJ1 ou des programmes géniques ciliés est liée à une altération de la clairance mucociliaire et à des phénotypes plus larges associés aux ciliopathies, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’épithélium respiratoire, de la fonction du tractus reproducteur et de l’homéostasie du liquide céphalorachidien. En tant que protéine nucléaire liant l’ADN, FOXJ1 constitue un point d’entrée exploitable pour analyser comment le contrôle transcriptionnel des gènes ciliaires influence la fonction barrière, les flux de liquide et les mécanismes de défense innée.

FOXJ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXJ1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXJ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXJ1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXJ1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXJ1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXJ1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXJ1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXJ1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXJ1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.