FOXI1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420369-ACT

Foxi1 kodiert den Forkhead-Box-Transkriptionsfaktor FOXI1, einen nukleären Regulator, der zur Festlegung des Schicksals epithelialer Zellen beiträgt und Genprogramme steuert, die für Ionentransport sowie die Säure‑Basen‑Homöostase erforderlich sind. Bei der Maus ist die FOXI1-Aktivität eng mit der Differenzierung und Funktion von Schaltzellen (intercalated cells) im Sammelrohr der Niere sowie mit der Epithelentwicklung im Innenohr verknüpft und beeinflusst die Expression von Transportern und Kanälen, die an der pH‑Regulation beteiligt sind. Über diese transkriptionellen Netzwerke greift Foxi1 in Signalwege ein, die die Epithelreifung, den Membrantransport und die Gewebehomöostase steuern. Eine Fehlregulation FOXI1-abhängiger Programme ist für die Forschung zu tubulären Nierenfunktionsstörungen und zur Biologie des sensorineuralen Hörens relevant, da eine veränderte epitheliale Spezifikation und Transporterexpression zu krankheitsassoziierten Phänotypen beitragen kann.

FOXI1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Foxi1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FOXI1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Foxi1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Foxi1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FOXI1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Foxi1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FOXI1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FOXI1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Foxi1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.