Plasmide CRISPR d'Activation (h) FOXF2: sc-404367-ACT

FOXF2 (forkhead box F2) est un facteur de transcription humain de la famille forkhead qui régule la différenciation mésenchymateuse, le remodelage de la matrice extracellulaire et la signalisation épithélio-mésenchymateuse au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. Il module des programmes transcriptionnels liés à la motilité cellulaire, à l’adhésion et au dialogue croisé stroma–épithélium, en interagissant avec des voies telles que la régulation génique dépendante de TGF-β et, plus largement, avec des réseaux de signalisation du développement. Une expression altérée de FOXF2 a été associée à des états de différenciation dérégulés et à des modifications de programmes d’expression génique liés à l’invasivité dans plusieurs contextes pathologiques. Ces propriétés font de FOXF2 un nœud utile pour disséquer le contrôle transcriptionnel de la spécification des lignages et des phénotypes induits par le microenvironnement.

FOXF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXF2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXF2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXF2 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.