Plasmide CRISPR/Cas9 KO FOXF1 (h): sc-403521

Présentation

FOXF1 (forkhead box F1) code un facteur de transcription de type forkhead qui contrôle l’identité des cellules mésenchymateuses et la signalisation épithélio-mésenchymateuse au cours du développement, avec des rôles majeurs dans la morphogenèse du poumon et de la vascularisation pulmonaire. FOXF1 régule des programmes géniques liés à l’organisation de la matrice extracellulaire, à la migration cellulaire et à la différenciation des cellules musculaires lisses et des péricytes, en s’intégrant à des voies de développement telles que les signalisations Hedgehog, WNT/β-caténine et TGF-β. Une altération du dosage de FOXF1 ou une perturbation de sa régulation a été associée à des anomalies pulmonaires et vasculaires congénitales et a été étudiée dans des contextes de remodelage stromal aberrant et d’interactions tumeur–microenvironnement. En tant que protéine nucléaire se liant à l’ADN, FOXF1 constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer les réseaux transcriptionnels qui coordonnent la mise en place des tissus et la stabilité vasculaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FOXF1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FOXF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FOXF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FOXF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FOXF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FOXF1 pour l'étude de la signalisation de FOXF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FOXF1 essentiels à la fonction de FOXF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FOXF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FOXF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FOXF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FOXF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FOXF1 plasmide HDR (h) et le FOXF1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FOXF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FOXF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.