FOXF1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403521-ACT

FOXF1 (forkhead box F1) kodiert einen Winged-Helix-Transkriptionsfaktor, der die mesenchymale Differenzierung und Organogenese reguliert und insbesondere an der Lungen- und Gefäßentwicklung maßgeblich beteiligt ist. Im Zellkern koordiniert FOXF1 Genprogramme, die Zellmigration, den Umbau der extrazellulären Matrix sowie Transkriptionsnetzwerke im Zusammenhang mit glatter Muskulatur/Perizyten steuern, und integriert dabei entwicklungsbiologische Signale wie die Aktivität der Hedgehog- und TGF-β-Signalwege. Veränderungen der FOXF1-Dosierung oder Störungen seiner Regulation sind mit angeborenen Lungen- und Gefäßerkrankungen verknüpft; zudem wurde eine aberrante Expression in Zusammenhängen von Gewebeumbau und der stromaassoziierten Tumorbiologie untersucht. Diese Eigenschaften machen FOXF1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die transkriptionelle Schaltlogik zu untersuchen, die Zustandsübergänge mesenchymaler Zellen und epithelial–mesenchymale Interaktionen steuert.

FOXF1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FOXF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FOXF1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FOXF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FOXF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FOXF1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FOXF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FOXF1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FOXF1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FOXF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.