Plasmide CRISPR d'Activation (h) FOXD3: sc-402673-ACT

FOXD3 (forkhead box D3) est un facteur de transcription de la famille forkhead qui joue un rôle central dans la mise en place des patrons embryonnaires précoces, la spécification de la crête neurale et le maintien d’états transcriptionnels associés à la pluripotence. En coordonnant l’engagement de lignée et en réprimant des programmes de différenciation prématurés, FOXD3 s’intègre aux réseaux de régulation génique du développement, à l’interface du remodelage de la chromatine et des voies de signalisation des cellules souches. Une expression dérégulée de FOXD3 a été impliquée dans des altérations du contrôle du destin cellulaire, la plasticité des cellules tumorales et des programmes transcriptionnels d’adaptation au stress, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier les mécanismes de métastase, de résistance aux traitements et de troubles du développement. Dans les systèmes modèles humains, l’activité de FOXD3 est souvent étudiée sous l’angle de la dynamique répression/activation transcriptionnelle, de l’utilisation des enhancers et du contrôle épigénétique des trajectoires de lignée.

FOXD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXD3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXD3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXD3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXD3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXD3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXD3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXD3 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXD3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.