Plásmido CRISPR de Activación (h) FOXD2: sc-410785-ACT

FOXD2 codifica un factor de transcripción de la familia forkhead box (FOX) que se une a motivos de ADN específicos de secuencia para regular programas de expresión génica implicados en la identidad celular y la organización del patrón durante el desarrollo. Como regulador nuclear, FOXD2 contribuye a redes transcripcionales que controlan la especificación de linaje, la diferenciación y la morfogénesis tisular mediante la modulación coordinada de genes diana aguas abajo. La desregulación del control transcripcional de la familia FOX se asocia con frecuencia a proliferación aberrante y estados de diferenciación alterados, lo que hace que FOXD2 sea relevante para estudios de trastornos del desarrollo y de los circuitos de regulación génica asociados al cáncer. Por ello, el FOXD2 humano es útil para investigar cómo la dosis de factores de transcripción remodela las salidas transcripcionales dependientes de la cromatina en sistemas modelo.

FOXD2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FOXD2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FOXD2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FOXD2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FOXD2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FOXD2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FOXD2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FOXD2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FOXD2 en células tumorales con expresión de FOXD2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.