Plasmide CRISPR d'Activation (h) FOXD1: sc-402521-ACT

FOXD1 (forkhead box D1) est un facteur de transcription de la famille forkhead qui régule, au cours du développement embryonnaire, les programmes de spécification du destin cellulaire, de prolifération et de différenciation, avec des rôles majeurs dans la morphogenèse rénale et la mise en place des lignages stromaux. En se liant à des motifs d’ADN de type forkhead, FOXD1 coordonne des réseaux transcriptionnels qui recoupent des voies de signalisation du développement telles que WNT, TGF-β et la signalisation MAPK/PI3K induite par des facteurs de croissance, afin de façonner l’architecture tissulaire. Une expression dérégulée de FOXD1 a été associée à des interactions épithélio-stromales altérées, au remodelage de la matrice extracellulaire et à des phénotypes cellulaires invasifs dans plusieurs contextes cancéreux, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier le contrôle transcriptionnel des programmes du microenvironnement tumoral. De plus, les circuits de régulation génique liés à FOXD1 sont utiles pour explorer des troubles du développement et des états transcriptionnels spécifiques de lignée dans les cellules humaines.

FOXD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.