FOXC2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420370-ACT

Forkhead-Box-Protein C2 (FOXC2), kodiert durch das Mausgen Foxc2, ist ein Winged-Helix-Transkriptionsfaktor, der Entwicklungs- und Gewebehomöostase-Programme durch kontextabhängige Regulation der Genexpression koordiniert. FOXC2 ist an der vaskulären und lymphatischen Entwicklung, an Schicksalsentscheidungen mesenchymaler Zellen sowie an epithelial–mesenchymalen Übergangs-ähnlichen Prozessen beteiligt und greift dabei in Signalwege wie TGF-β-, Notch- und Wnt-Signaling ein, die Morphogenese und Remodeling prägen. Eine veränderte FOXC2-Aktivität ist mit Defekten der lymphatischen und kardiovaskulären Biologie assoziiert und wurde in krankheitsassoziierten Modellen mit fehlregulierter Zellmigration und Invasivität in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen Foxc2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung transkriptioneller Netzwerke, die Differenzierung, Barrierefunktion und Gewebeumbau steuern.

FOXC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Foxc2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FOXC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Foxc2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Foxc2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FOXC2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Foxc2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FOXC2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FOXC2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Foxc2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.