FOXC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421637-ACT

Foxc1 codifica o fator de transcrição forkhead box FOXC1, um regulador de ligação ao DNA dependente de sequência que controla o padrão de desenvolvimento, decisões de destino celular e programas de diferenciação. Em sistemas murinos, o FOXC1 integra sinais em redes transcricionais envolvidas em interações mesenquimais–epiteliais, remodelamento da matriz extracelular e vias reguladas por morfógenos, como TGF-β/BMP e WNT, para moldar a organogênese e a homeostase tecidual. Alterações na dosagem ou na atividade regulatória de FOXC1 estão ligadas a fenótipos congênitos do segmento anterior e craniofaciais e têm sido associadas à desregulação da identidade celular e a assinaturas de expressão gênica invasiva na biologia do câncer. Essas propriedades tornam o FOXC1 um nó útil para dissecar circuitos regulatórios gênicos que governam o desenvolvimento, estados do tipo-tronco e respostas ao microambiente.

FOXC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Foxc1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Foxc1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Foxc1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Foxc1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXC1 em células tumorais com expressão de Foxc1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.