Fos B Double Nickase Plasmid (h): sc-400306-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Fos B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Fos B Double-Nickase-Plasmid (h) und Fos B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FOSB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Fos B: sc-398595
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Fos B Double Nickase Plasmid (h) | sc-400306-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fos B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400306-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOSB kodiert Fos B, einen Transkriptionsfaktor der AP-1-Familie, der mit JUN-Proteinen Heterodimere bildet, um stimulusabhängige Genexpressionsprogramme zu regulieren. Es wird rasch durch mitogene und Stresssignale induziert und integriert MAPK/ERK-Signale, um Zellproliferation, Differenzierung und adaptive Antworten zu steuern, mit bemerkenswerten Funktionen in der aktivitätsabhängigen Transkription in Neuronen. Fos B und seine Spleißvarianten beeinflussen das Chromatin-Remodeling sowie nachgeschaltete Immediate-Early-Gen-Netzwerke, die langfristige Veränderungen des Zellzustands prägen. Eine dysregulierte FOSB-Aktivität wurde mit onkogenen Transkriptionsprogrammen sowie mit krankheitsassoziierten Signalveränderungen bei neuropsychiatrischen und neurodegenerativen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was FOSB zu einem nützlichen Knotenpunkt für Studien zu Signalwegen und regulatorischen Netzwerken macht.
Fos B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FOSB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FOSB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FOSB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FOSB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.