Plasmide CRISPR/Cas9 KO FNIP2 (h): sc-409140

Présentation

FNIP2 (folliculin interacting protein 2) est un partenaire de liaison cytoplasmique du suppresseur de tumeurs FLCN et intervient dans la signalisation de détection des nutriments et de l’homéostasie énergétique. Elle contribue à la régulation de l’axe AMPK–mTOR et participe à des processus associés aux lysosomes qui couplent la disponibilité des acides aminés à l’adaptation métabolique, avec des effets en aval sur l’autophagie et le contrôle de la croissance cellulaire. Par ses interactions avec FLCN et des complexes apparentés, FNIP2 influence la fonction mitochondriale et les réponses au stress dans des tissus métaboliquement actifs. La dérégulation de la signalisation FLCN–FNIP a été associée à des voies impliquées dans la prédisposition tumorale héréditaire et, plus largement, dans des mécanismes de maladies métaboliques, ce qui souligne sa pertinence pour l’étude de la croissance cellulaire et de l’homéostasie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FNIP2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FNIP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FNIP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FNIP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FNIP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FNIP2 pour l'étude de la signalisation de FNIP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FNIP2 essentiels à la fonction de FNIP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FNIP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FNIP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FNIP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FNIP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FNIP2 plasmide HDR (h) et le FNIP2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FNIP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FNIP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.