Plasmide CRISPR d'Activation (h) FMR1: sc-401919-ACT

FMR1 code la protéine du retard mental X fragile (FMRP), une protéine se liant à l’ARN qui régule le transport des ARNm, leur stabilité et la répression de leur traduction aux synapses et dans d’autres compartiments neuronaux. FMRP module la synthèse protéique dépendante de l’activité via des interactions avec des complexes ribonucléoprotéiques et des voies de signalisation qui façonnent la plasticité synaptique, notamment la traduction dépendante des mGluR et, plus largement, des programmes de développement neuronal. Une dérégulation de l’expression ou de la fonction de FMR1 est associée aux troubles liés à l’X fragile et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible largement utilisée pour étudier le contrôle post‑transcriptionnel dans le cerveau. Dans des cellules en culture et des systèmes modèles, FMR1 est fréquemment étudié afin de cartographier ses ARN cibles, de définir des réseaux de contrôle de la traduction et d’explorer les mécanismes d’expression génique sensibles à l’activité.

FMR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FMR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FMR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FMR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FMR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FMR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FMR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FMR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FMR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FMR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.