Plasmide CRISPR d'Activation (h) FMNL1: sc-404817-ACT

La protéine de type formin 1 (FMNL1) est un facteur de nucléation et d’élongation de l’actine régulé par les GTPases Rho, qui soutient le remodelage dynamique du cytosquelette cortical. Elle contribue à la formation de filopodes, à la polarité cellulaire, à l’adhésion et à la migration en coordonnant l’assemblage des filaments d’actine en aval de voies de signalisation telles que RhoA et Cdc42. FMNL1 est fortement exprimée dans les lignées hématopoïétiques et est fréquemment étudiée dans le contexte du trafic des cellules immunitaires, de la phagocytose et de l’organisation de la synapse immunologique. Une dérégulation du contrôle du cytosquelette impliquant FMNL1 a été associée à une altération de la fonction leucocytaire et a été explorée dans la biologie des maladies inflammatoires et hématologiques comme un mécanisme influençant la motilité cellulaire et l’infiltration tissulaire.

FMNL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FMNL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FMNL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FMNL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FMNL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FMNL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FMNL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FMNL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FMNL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FMNL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.