Plasmide CRISPR/Cas9 KO Flt-4 (h): sc-400684

Présentation

FLT4 code pour le récepteur tyrosine kinase Flt-4 (VEGFR-3), l’un des principaux médiateurs de la signalisation lymphangiogénique en aval de VEGFC et VEGFD. L’activation dépendante du ligand déclenche une autophosphorylation et mobilise les voies PI3K–AKT, MAPK/ERK, PLCγ, ainsi que d’autres voies apparentées, qui régulent la survie et la migration des cellules endothéliales, ainsi que l’organisation (patterning) des vaisseaux lymphatiques. L’activité de Flt-4 contribue au développement vasculaire et lymphatique et est fréquemment étudiée dans le contexte de la lymphangiogenèse associée aux tumeurs, de la dissémination métastatique et du remodelage inflammatoire. Une dérégulation de la signalisation de FLT4 a également été associée à des troubles lymphatiques héréditaires, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique en biologie vasculaire et dans des modèles de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Flt-4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FLT4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FLT4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FLT4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Flt-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FLT4 pour l'étude de la signalisation de Flt-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FLT4 essentiels à la fonction de Flt-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FLT4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Flt-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Flt-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FLT4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Flt-4 plasmide HDR (h) et le Flt-4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FLT4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FLT4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.