Plasmide Double Nickase (m) Flotillin-2: sc-420382-NIC

Flot2 code la flotilline‑2, une protéine d’échafaudage associée aux radeaux lipidiques, enrichie à la membrane plasmique et dans les compartiments endosomaux, où elle contribue à organiser les microdomaines membranaires. La flotilline‑2 participe à l’endocytose indépendante de la clathrine, au trafic membranaire et à la transduction du signal en coordonnant l’internalisation des récepteurs et les voies kinasiques en aval, notamment les voies MAPK et PI3K/AKT. Elle contribue également à la dynamique du cytosquelette d’actine, à l’adhérence cellulaire et à la migration via des interactions avec des domaines de type cavéole et des régulateurs du cytosquelette. Des altérations de l’expression ou de la localisation de la flotilline‑2 ont été associées à des phénotypes de prolifération et d’invasion dérégulés en cancérologie, ainsi qu’à des perturbations de la signalisation neuronale et des cellules immunitaires, ce qui étaye sa pertinence dans des modèles mécanistiques de maladie.

Flotillin-2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Flot2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Flot2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Flot2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Flot2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.