Plasmide CRISPR d'Activation (h) Flk-1/KDR/VEGFR2: sc-400118-ACT

KDR code pour le récepteur tyrosine kinase VEGFR2 (Flk-1/KDR), un nœud majeur de signalisation des réponses endothéliales vasculaires induites par le VEGF. Après liaison du ligand et autophosphorylation du récepteur, VEGFR2 active les cascades PI3K–AKT, PLCγ–PKC–MAPK/ERK, Src/FAK et celles liées à l’eNOS, qui coordonnent la prolifération, la migration, la survie et la perméabilité endothéliales. Cette voie est au cœur des programmes angiogéniques et lymphangiogéniques et est fréquemment étudiée dans des contextes de néovascularisation tumorale, de remodelage associé à l’ischémie et de dysfonction vasculaire inflammatoire. Une signalisation KDR dérégulée a été associée à une altération de l’intégrité microvasculaire et à des interactions anormales endothélium–péricytes, pertinentes pour la biologie des maladies cardiovasculaires et oculaires.

Flk-1/KDR/VEGFR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KDR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Flk-1/KDR/VEGFR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KDR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KDR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Flk-1/KDR/VEGFR2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KDR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Flk-1/KDR/VEGFR2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Flk-1/KDR/VEGFR2 dans les cellules tumorales présentant une expression de KDR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.