Plasmide CRISPR/Cas9 KO FLJ23356 (h): sc-406964

Présentation

POMK (protéine O-mannose kinase), également référencé sous le nom FLJ23356, code une kinase localisée dans l’appareil de Golgi, nécessaire à la phosphorylation de l’O-mannose sur l’α‑dystroglycane, une étape clé de la maturation des glycannes qui soutient la liaison à la matrice extracellulaire. Cette activité s’inscrit dans le réseau de glycosylation lié à l’O‑mannosylation et aux dystroglycanopathies, et recoupe des voies contrôlant l’organisation de la membrane basale, l’adhésion cellulaire et l’intégrité des tissus muscle–cerveau. La perturbation de la glycosylation dépendante de POMK altère les interactions de l’α‑dystroglycane avec ses ligands et dérègle les complexes de signalisation associés à la membrane. Des défauts génétiques de POMK sont associés à des dystroglycanopathies et à des phénotypes de dystrophie musculaire congénitale, ce qui en fait un locus utile pour modéliser des mécanismes pathologiques liés à la glycosylation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FLJ23356 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène POMK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du POMK, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert POMK à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FLJ23356.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en POMK pour l'étude de la signalisation de FLJ23356, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de POMK essentiels à la fonction de FLJ23356
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de POMK pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FLJ23356 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FLJ23356 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus POMK. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FLJ23356 plasmide HDR (h) et le FLJ23356 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie POMK pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles POMK définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.