Plasmide Double Nickase (h) FLG/Filaggrin: sc-400644-NIC

FLG code la filaggrine, une protéine structurale clé produite sous forme de profilaggrine dans les kératinocytes en cours de différenciation, puis transformée par protéolyse en monomères de filaggrine qui agrègent les filaments intermédiaires de kératine. Cette fonction soutient la différenciation terminale de l’épiderme, la compaction des cornéocytes et la formation de la barrière de la couche cornée ; ses produits de dégradation contribuent en outre aux facteurs naturels d’hydratation, qui régulent l’hydratation et le pH de surface de la peau. L’activité de FLG s’intègre aux programmes de kératinisation et d’assemblage de l’enveloppe cornée en aval des réseaux de signalisation de la différenciation épidermique. Les variations génétiques ou une diminution de l’expression de la filaggrine sont fortement associées à des phénotypes de dysfonction de la barrière et à une susceptibilité accrue aux maladies inflammatoires cutanées, faisant de FLG une cible fréquente des études sur l’homéostasie épithéliale et les mécanismes de l’inflammation cutanée.

FLG/Filaggrin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FLG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FLG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FLG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FLG.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.