FKSG80 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-433960

Übersicht

Hcar1 kodiert einen laktatsensitiven G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der daran beteiligt ist, die extrazelluläre Verfügbarkeit von Laktat mit intrazellulären Signalprogrammen zu verknüpfen, welche den zellulären Stoffwechsel und die Immunmodulation in Mausgeweben regulieren. Die Rezeptoraktivierung ist mit einer Gi/o‑abhängigen Suppression von cAMP sowie nachgeschalteten Effekten auf die MAPK‑Signalübertragung, transkriptionelle Antworten und eine metabolische Umprogrammierung während Hypoxie oder hoher glykolytischer Flussraten verbunden. Aufgrund seiner Rolle in der Laktat‑Signalgebung wird Hcar1 in Zusammenhängen wie Entzündung, Neurobiologie, Fett‑ und Muskelphysiologie sowie tumorassoziierten Mikroumgebungen untersucht, in denen Laktatgradienten das Zellverhalten prägen. Eine dysregulierte Signalgebung über Laktatrezeptoren ist daher für Signalwege relevant, die die Energiehomöostase und Stressanpassung über mehrere Organsysteme hinweg koordinieren.

Das FKSG80 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hcar1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hcar1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hcar1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FKSG80-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hcar1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FKSG80-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hcar1-Exone abzielen, die für die FKSG80-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hcar1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FKSG80 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FKSG80 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hcar1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FKSG80 HDR-Plasmid (m) und FKSG80 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hcar1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hcar1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.