Plasmide Double Nickase (h) FKHRL1/FOXO3a: sc-400308-NIC

FOXO3 (FKHRL1/FOXO3a) code un facteur de transcription de la famille forkhead box O qui intègre les signaux des facteurs de croissance et des nutriments afin de réguler le contrôle du cycle cellulaire, la résistance au stress oxydatif, l'autophagie et l'apoptose. L'activité de FOXO3 est étroitement contrôlée par des modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation médiée par AKT en aval de la voie PI3K–AKT, qui entraîne sa séquestration dans le cytoplasme, ainsi que par des signaux induits par le stress, tels qu'AMPK et JNK, qui favorisent sa localisation nucléaire et son activité transcriptionnelle. En régulant des cibles impliquées dans le métabolisme, les réponses aux dommages de l'ADN et la protéostase, FOXO3 contribue à l'homéostasie cellulaire dans de multiples lignages. Une dérégulation de la signalisation de FOXO3 a été associée à une tolérance au stress et à des programmes de survie altérés, pertinents pour la biologie du cancer, la neurodégénérescence, les dysfonctions métaboliques et la régulation immunitaire.

FKHRL1/FOXO3a Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FOXO3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FOXO3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FOXO3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FOXO3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.