Plasmide Double Nickase (h) FKHR/FOXO1: sc-400137-NIC

FOXO1 (FKHR) code un facteur de transcription de la famille « forkhead box » qui intègre les signalisations insulinique/IGF‑1 et PI3K–AKT aux programmes cellulaires contrôlant le métabolisme, les réponses au stress oxydatif, l'arrêt du cycle cellulaire et l'apoptose. La phosphorylation dépendante d'AKT régule la navette nucléocytoplasmique de FOXO1 et son activité transcriptionnelle, reliant l'état nutritionnel à des programmes d'expression génique tels que la gluconéogenèse et l'autophagie. FOXO1 interagit également avec les voies TGF‑β/SMAD et MAPK afin de moduler la différenciation et l'homéostasie tissulaire. Une activité ou une localisation dérégulée de FOXO1 est impliquée dans les dysfonctionnements métaboliques et la biologie des cancers, et des altérations génomiques de FOXO1, comme des événements de fusion, sont utilisées pour étudier la reprogrammation transcriptionnelle oncogénique.

FKHR/FOXO1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FOXO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FOXO1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FOXO1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FOXO1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.