Particules Lentivirales d'Activation (h) FKBPL: sc-410504-LAC

Le gène humain FKBPL code la protéine de type FK506-binding (FKBPL), une immunophiline atypique qui agit comme co-chaperon de HSP90 et comme régulateur d’échafaudage de protéines de signalisation impliquées dans la protéostasie, le contrôle du cycle cellulaire et les réponses au stress. Par des mécanismes dépendants des chaperons, FKBPL influence le repliement et la stabilité des protéines et a été associée à la régulation de la signalisation des récepteurs stéroïdiens ainsi qu’à des voies liées aux réponses inflammatoires médiées par NF-κB. Des modifications de l’expression de FKBPL ont été rapportées dans de multiples contextes pathologiques, notamment dans des phénotypes associés au cancer tels que la prolifération, les réponses aux dommages de l’ADN et des programmes liés à l’angiogenèse, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique pour l’exploration des voies de signalisation. Ces caractéristiques font de FKBPL une cible pertinente pour disséquer les réseaux de chaperons, la régulation transcriptionnelle et la signalisation du stress dépendante du contexte dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales FKBPL (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de FKBPL dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FKBPL (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription FKBPL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FKBPL. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif FKBPL ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.