Plasmide Double Nickase (h) FKBP25: sc-410783-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FKBP25 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FKBP25 Double Nickase (h) et le plasmide FKBP25 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FKBP3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FKBP25 Antibody (H-6): sc-374357
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FKBP25 | sc-410783-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FKBP25 | sc-410783-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **FKBP3** code **FKBP25**, une immunophiline nucléaire dotée d’une activité isomérase peptidyl-prolyl cis–trans, qui agit comme chaperon de repliement des protéines et comme échafaudage dans des processus associés à la chromatine. FKBP25 interagit avec l’ADN et des régulateurs transcriptionnels pour moduler les programmes d’expression génique, et a été impliquée dans la régulation de la biogenèse des ribosomes, des réponses aux dommages de l’ADN et de la signalisation adaptative au stress. Par ces activités, FKBP25 contribue au contrôle de la progression du cycle cellulaire et de l’homéostasie protéique, des voies fréquemment perturbées dans des contextes de maladies prolifératives et neurodégénératives. Des altérations de l’expression ou de la localisation de FKBP3/FKBP25 ont été rapportées dans plusieurs situations pertinentes sur le plan pathologique, soutenant son utilisation comme nœud mécanistique pour l’étude du contrôle qualité des protéines nucléaires et de la régulation transcriptionnelle.
FKBP25 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FKBP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FKBP3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FKBP3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FKBP3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.