Plásmido Doble Nickase (h) FIP1L1: sc-413438-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)FIP1L1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FIP1L1 (h) y el plásmido de doble nickasa FIP1L1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FIP1L1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FIP1L1 Anticuerpo (C-10): sc-398392
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) FIP1L1 | sc-413438-NIC | 20 µg | $410.00 |
FIP1L1 codifica una subunidad central del complejo del factor de especificidad de corte y poliadenilación (CPSF), que participa en el procesamiento del extremo 3′ de los pre-ARNm, incluida la selección del sitio de poli(A) y el acoplamiento del corte con la poliadenilación. A través de interacciones con la poli(A) polimerasa y otros factores de procesamiento, FIP1L1 contribuye a moldear la diversidad de isoformas de transcritos y la estabilidad del ARNm, influyendo así en programas de expresión génica vinculados a la proliferación y la diferenciación. La desregulación del procesamiento de ARN mediado por FIP1L1 es relevante para la reprogramación transcripcional oncogénica, y las reorganizaciones cromosómicas que implican a FIP1L1 están bien descritas en neoplasias mieloides como impulsoras de una señalización aberrante de quinasas. Estas características hacen de FIP1L1 un nodo útil para estudiar la formación del extremo 3′ del ARN, la poliadenilación alternativa y las consecuencias posteriores sobre el estado celular.
FIP1L1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FIP1L1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FIP1L1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FIP1L1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FIP1L1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.