Plasmide CRISPR/Cas9 KO FIP1L1 (h): sc-413438

Présentation

FIP1L1 code une sous-unité centrale du complexe CPSF (cleavage and polyadenylation specificity factor), qui contribue à définir les sites de maturation de l’extrémité 3′ des pré-ARNm et à coordonner l’ajout de la queue poly(A). Grâce à des interactions avec des facteurs de polyadénylation et la machinerie de maturation couplée à l’ARN polymérase II, FIP1L1 participe à la maturation des transcrits, à leur stabilité et à des programmes régulés d’expression génique. Une altération de la fonction de FIP1L1 est pertinente dans le dérèglement de la maturation des ARN et a été impliquée dans la biologie des hémopathies malignes, notamment via le réarrangement FIP1L1–PDGFRA observé dans certaines néoplasies myéloïdes. Par conséquent, FIP1L1 est fréquemment étudié dans des voies reliant la formation de l’extrémité 3′ des ARNm à la prolifération cellulaire, à la différenciation et aux réponses transcriptionnelles induites par le stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FIP1L1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FIP1L1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FIP1L1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FIP1L1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FIP1L1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FIP1L1 pour l'étude de la signalisation de FIP1L1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FIP1L1 essentiels à la fonction de FIP1L1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FIP1L1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FIP1L1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FIP1L1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FIP1L1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FIP1L1 plasmide HDR (h) et le FIP1L1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FIP1L1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FIP1L1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.